qPCR中的絕對(duì)定量是什么？

絕對(duì)定量目的是使用PCR測(cè)定目的基因在樣本中的數(shù)量，即拷貝數(shù)。

在絕對(duì)定量中，想要得到目的基因的拷貝數(shù)，需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度，作為模板進(jìn)行PCR。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板。

結(jié)束PCR后，以測(cè)得的CT值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。

對(duì)待測(cè)樣品的目的基因進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖，即可計(jì)算出樣品中目的基因的拷貝數(shù)。

需要注意的是：

1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來(lái)源可靠、濃度已知

2、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測(cè)樣品要同時(shí)在儀器中擴(kuò)增

3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍，進(jìn)行樣品濃度的推測(cè)