細胞轉染總是失?。恳晃慕棠闳绾巫龊眉毎D染實驗

細胞轉染技術是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。其在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產(chǎn)等實驗和應用中使用越來越廣泛。然而，轉染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難題。尤其是原代細胞轉染，更是因為難度大，效率低從而使得科研人員們頭痛不已，談“轉染"色變······

這里，小編根據(jù)收集做細胞轉染多年的經(jīng)驗和體會，總結出了以下導致細胞轉染效率低下，經(jīng)常“翻車"的大坑，以及避免掉坑里的一些做法。

影響細胞轉染效率的因素, 轉染中經(jīng)常翻車的點

影響轉染效率的因素有很多，細胞株本身的特性和活性，細胞培養(yǎng)條件，轉染的DNA 或RNA 的質量， 轉染方法，轉染試劑的選擇等。

一、準備不充分、轉染條件不佳

一般情況下，做細胞轉染時除了必要的試劑、細胞和DNA等要準備充分外，實驗的條件和操作步驟要求等都應該嚴格遵守。比如：脂質體的用量、DNA濃度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等。只有避免這些人為因素導致的低級錯誤才能更好地分析提高轉染效率的方法。

二、細胞問題：狀態(tài)不好、污染等

對于細胞轉染實驗，細胞自然是其中較為重要的實驗材料之一。在實驗室時，每次細胞轉染之前都要檢查細胞狀態(tài)和細胞密度是否合適。一般進行轉染的細胞應該是在對數(shù)生長期，如果不合適或細胞狀態(tài)太差，那寧可晚幾天做轉染，也不能盲目地去做實驗。否則只會偷雞不成蝕把米，大大影響后續(xù)的實驗結果。

三、轉染的DNA質量不好：濃度太低、克隆不對等

當我們在做細胞轉染實驗時，需要轉染的質粒DNA的質量也是影響轉染效率的一大因素。如果DNA的濃度太低、純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會導致我們轉染效率低下甚至失敗。此外值得注意的是，實驗中常常需要轉染的并不是質粒DNA，而是RNA。對于轉染RNA而言，我們一般推薦Zeta Life公司Advanced系列轉染試劑，它的優(yōu)勢是市面上所有的RNA ，Zeta Life 公司Advanced系列轉染試劑都可以轉染。這是一種采用的是新型小分子多肽材料，其特點是非脂質體材料，可通過細胞主動吞噬吸收進入細胞，進入細胞后可以被代謝。之所以選擇這一款產(chǎn)品，主要是由于其具有超高的轉染效率，對細胞無內毒素影響，不易出現(xiàn)細胞死亡，易于優(yōu)化，具有出色的轉染效率，適用細胞種類多，以及簡單快速的實驗方案等優(yōu)點。

實驗過程中，只需在細胞融合度為在60%-80%時進行細胞轉染，質粒DNA（或RNA）與轉染試劑直接1：1混合，無需分別稀釋再混合。全程使用含血清的*培養(yǎng)基，不需要轉染前后兩次更換培養(yǎng)基。使用簡單、快速且具有很高的轉染效率。

四、細胞本身轉染困難

對于細胞本身轉染困難這個問題，就并非人為原因了，細胞類型的不同相應的轉染效率也會差很多。尤其是對于最難轉染的干細胞，就更是令大家伙頭疼，甚至讓大家聞之色變。但是，屏幕前的讀者可能想不到，其實對于很多有經(jīng)驗的科研人員來說，在多能干細胞(PSC)和神經(jīng)干細胞(NSC)這些細胞中，照樣能獲得高達80%或更高的轉染效率，在間充質干細胞(MSC)中獲得高達45%的轉染效率。至于他們是如何做到如此優(yōu)秀的？用的就是Zeta Life公司Advanced系列轉染試劑。各種細胞類型中最高的轉染效率。可用于多種真核細胞系的DNA轉染、siRNA轉染和共轉染；可用于各種原代細胞的DNA轉染、siRNA轉染；可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞、原代細胞、干細胞等。

五、轉染試劑選擇不對

轉染試劑的好壞，直接影響了細胞轉染實驗的成敗。如果，你對于現(xiàn)今市面上復雜的轉染試劑還不了解，那么這款Advanced DNA RNA Transfection Reagent就是你的*！

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑采用中新型小分子多肽材料，包含了較為*的小分子材料轉染技術，能夠提供高效的轉染性能，改善相關應用的結果及可重復性。此試劑可將轉染效率提升數(shù)倍，并可改善細胞活性，廣泛適用于難轉染的及常見的細胞類型（例如RAW264.7細胞和THP-1細胞）。

1、有效轉染難于轉染的細胞

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑專門針對難轉染的細胞種類進行了優(yōu)化，能夠為廣泛的細胞種類提供突出的轉染性能。即使是在原代細胞和干細胞等難轉細胞中，也能實現(xiàn)高效轉染。

2、助力癌癥研究

使用與癌癥相關的細胞系得到與您研究的問題相關的答案。憑借更廣的適用細胞類型、更高的轉染效率，Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑讓您能夠靈活選擇研究所用的細胞系。

3、在低毒條件下獲得優(yōu)異的轉染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent的多肽小分子用量在很寬的動態(tài)范圍內均能保持很高的轉染效率，可按需進行簡便快速的條件優(yōu)化。在需要將細胞損傷降到至低的相關應用中。

4、在新型基因組編輯的相關應用中獲得高轉染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent適用于新型基因組編輯的相關應用。通過高效率的轉染，它能夠增加TALEN或CRISPR系統(tǒng)剪切和重組的成功概率，最終使得基因修飾的效率實現(xiàn)，并簡化后續(xù)處理步驟。

與傳統(tǒng)脂質體轉染試劑的效果比較： 

以上說了這么多，也給大家安利了一些實用的產(chǎn)品，相信大家對于如何提高細胞轉染效率也更加有了信心。