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    乙醇沉淀法

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-17　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4255次

    原理

    DNA 溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會(huì)奪DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混 合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因?yàn)闊o水乙醇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時(shí),就會(huì)影響收得率。折中的做法初次沉淀DNA時(shí)可用95%乙醇代替無水乙醇,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

    材料與儀器

    DNA
    乙酸鈉 乙醇
    EP管 低溫離心機(jī) 移液器 -70度冰箱

    步驟


    1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內(nèi)切酶和配套Buffer。
     
    2. 在離心管中加入如下成分：
    10xBuffer　  1ul
    待切樣品　　　xul
    酶　　　　　　0.5-1ul
    ______________________
    加水補(bǔ)足10ul
     
    3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。
     
    4. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr，若待切樣品為PCR 產(chǎn)物，則可將反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)延長。
     
    5. 用未酶切的質(zhì)粒作為對(duì)照，瓊脂糖電泳鑒定酶切結(jié)果。
     
    注：當(dāng)酶切樣品用于回收而不是鑒定時(shí)，可按比例適當(dāng)加大反應(yīng)體積。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer 或者通用Buffer，但要注意不能有星反應(yīng)。


    注意事項(xiàng)

    移去上清液時(shí)需要緩慢操作，以免將DNA樣品弄出。

    常見問題

    乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。

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