細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)

取出冷凍管后，須立即放入37 C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。

除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分貼壁細(xì)胞株，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有12-16ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，懸浮細(xì)胞可先離心去掉DMSO，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。

不能。每一個(gè)細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無(wú)法存活或者老化空泡現(xiàn)象，如一定要替換，建議馴化，按照血清的馴化方式操作即可。

需要按比例馴化，新舊血清比為：3：2，1：2，1：3直到*更替。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，整體50%以下2-3天更換一次培養(yǎng)基，整體密度50%以上一天更換一次或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于–20 C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部分含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)和細(xì)胞的生長(zhǎng)情況傳代，若第一次接種不了解細(xì)胞的基本特征，建議1：2傳代，后續(xù)觀察細(xì)胞特點(diǎn)，若1-2天即可達(dá)到密度80%以上建議1：3或以上。傳代的時(shí)候請(qǐng)注意：細(xì)胞數(shù)太少或稀釋得太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因。

欲回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10分鐘，過(guò)高之轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。