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    堿裂解法質粒抽提試劑盒的原理是什么?

    發(fā)布時間: 2022-06-08  點擊次數(shù): 3035次

    這次講解堿裂解法,從大腸桿菌中抽提質粒的基本原理。


    我們將搖菌得到的混合物離心,去除培養(yǎng)基,就可以獲得大腸桿菌,加入溶液1重懸。溶液1含緩沖成分,和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2,含NaOH和SDS。在強堿環(huán)境下,細菌的細胞壁和細胞膜被破壞,釋放出基因組DNA和質粒DNA。此時基因組DNA雙螺旋結構被破壞,發(fā)生變性。質粒DNA也會發(fā)生變性,但兩條互補鏈仍會互相盤繞,并緊密的結合在一起。


    當加入溶液3(含醋酸鉀溶液)使pH恢復中性時,共價閉合環(huán)狀質粒DNA復性快,而線性的染色體DNA復性緩慢,細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復合物,被十二烷基硫酸鹽包蓋,從溶液中有效地沉淀下來。經(jīng)過離心除去變性劑后,就可以從上清中回收復性的質粒DNA。


    質粒抽提試劑盒中,通常還有 DNA吸附柱,將質粒DNA吸附,其他的雜質被洗去。最后用洗脫液,將質粒DNA洗脫下來。


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