冷凍組織及切片的準(zhǔn)備

一、材料

1. 緩沖液、溶液和試劑

丙酮

蒸餾水

干冰

磷酸鹽緩沖液（PBS)

Tek OCT 組織復(fù)合物（Sakura FinetekUSA，Torrance，CA)

2. 特殊設(shè)備

封閉容器

燒杯

恒冷裝置

解剖工具

平盤

可以削去的一次性組織模子（Pelco International，Redding，CA)

普通的無粘片劑的載玻片

Sakura 刀片（IMEB，SanMarcos，CA)

3. 細(xì)胞和組織

新鮮的組織（見二、方法中的（2））

二、方法

1. 冷凍組織的準(zhǔn)備

(1) 蓋上盛有包埋介質(zhì)的模子（推薦使用 Tek O C T 組織復(fù)合物），準(zhǔn)備干冰-丙酮浴(在燒杯中簡(jiǎn)單混合干冰和丙酮）。

(2) 處死動(dòng)物并取出目的組織與包埋介質(zhì)混合。

(3) 放組織于冷模子底上。為了便于利用恒冷裝置，反向放目的切面于冷模子底上。

(4) 將冷模子的底部放于干冰-丙酮浴的表面，這樣樣品將在 3~4 min 內(nèi)逐漸冷卻。當(dāng)品冷凍后將呈現(xiàn)白色。在冷凍時(shí)不要將模子掉入丙酮中。

(5) 從模子中移去組織，放于-80°C 直到切片。如果組織樣品放置時(shí)間較長(zhǎng)，將其放盛有冷的蒸餾水的密封容器中以保持濕度。

2. 切片及保存

(1) 取冷凍的樣品置于含 O C T 復(fù)合物的低溫冷箱中，采用標(biāo)準(zhǔn)的冷凍組織切片法。

(2) 讓樣品與冷箱中溫度（-25~-20°C) 平衡 15~20 min。如果樣品在切片時(shí)組織塊太冷，平衡時(shí)間可以適度延長(zhǎng)。

(3) 將準(zhǔn)備用于 LCM 的切片（厚度 1~5um) 放于普通的無粘片劑的載破片上。如果組織粘于載玻片上太緊，可能不利于后續(xù)的 LCM 操作。

(4) 放置好后，立即放到干冰上。如果當(dāng)天做 LCM，片子應(yīng)當(dāng)放在干冰上。否則，應(yīng)儲(chǔ)存于-80°C。