穩(wěn)定載體時(shí)，為什么載體上通常有兩個(gè)抗性基因？

構(gòu)建的載體上有兩個(gè)抗性基因，但一般只有一個(gè)抗性用來(lái)篩細(xì)胞。兩個(gè)抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢？

我們來(lái)看看這個(gè)例子，現(xiàn)在這個(gè)是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜，載體上有兩個(gè)抗性基因，Amp（氨芐青霉素）和Neo（新霉素）。

氨芐青霉素是在bla啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá)，bla是原核表達(dá)啟動(dòng)子，在大腸桿菌可以表達(dá)，因此，轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來(lái)。

而新霉素是在SV40啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá)，SV40是真核表達(dá)啟動(dòng)子，轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞后表達(dá)，所以只有轉(zhuǎn)進(jìn)了載體的細(xì)胞才能被篩選出來(lái)。

所以，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)，載體上的兩個(gè)抗性基因，一個(gè)用于構(gòu)建克隆時(shí)篩選細(xì)菌，另一個(gè)用來(lái)對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選。

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