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    Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠 使用指南

    發(fā)布時(shí)間: 2024-06-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1735次

    Cre-ERT2小鼠是一類含有雌激素受體的配體結(jié)合區(qū)突變體(ERT)與cre重組酶的融合蛋白表達(dá)的小鼠。Cre-ERT2在無(wú)Tamoxifen誘導(dǎo)的情況下,在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)處于無(wú)活性狀態(tài);當(dāng)Tamoxifen誘導(dǎo)后,Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT(雌激素類似物)與ERT結(jié)合,可使Cre-ERT2進(jìn)核發(fā)揮Cre重組酶活性。


    Tamoxifen給藥建議如下:

    Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠 使用指南

    3. 他莫昔芬的給藥方式

    他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥,應(yīng)用比較廣的是腹腔注射給藥,腹腔注射的給藥劑量精準(zhǔn),便于控制。

    腹腔注射給藥流程:正確抓取小鼠,將小鼠的鼻子朝向地面,露出腹部;定位動(dòng)物的中線并將腹部分成四個(gè)象限,特別是動(dòng)物的右下象限,是腹腔注射的合適位置(右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu));多次腹腔注射時(shí),應(yīng)交替注射部位。

    Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠 使用指南

    注:Tamoxifen會(huì)影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn),孕鼠誘導(dǎo)的時(shí)間盡量選擇孕晚期,并同時(shí)注射孕酮來減少流產(chǎn)概率。

    灌胃給藥的給藥劑量和頻率與腹腔注射相同,在正式實(shí)驗(yàn)前,建議同學(xué)們先反復(fù)練習(xí),熟練掌握灌胃給藥的技巧。

    飲食/飲水給藥使用較少,主要是他莫昔芬水溶性差,小鼠的給藥劑量不好量化,且需要的誘導(dǎo)時(shí)間較長(zhǎng)(一般需要幾周進(jìn)行誘導(dǎo)),在誘導(dǎo)期間往往還伴隨著小鼠體重的下降(約10-15%)。


    4. 注意事項(xiàng)

    A. 他莫昔芬注射完成后不建議立刻開展實(shí)驗(yàn),一般來講,停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天,再安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    B. 對(duì)照組小鼠需要同步進(jìn)行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。

    C. 未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng),小鼠舐舔到他莫昔芬懸液,梳毛等行為可能導(dǎo)致意外敲除。

    D. 加熱不會(huì)導(dǎo)致Tamoxifen失效,37℃過夜溶解他莫昔芬是沒有問題的。

    最后,不同的實(shí)驗(yàn)方案、不同的小鼠品系、不同的組織器官等對(duì)于給藥劑量、給藥頻率和給藥方式等的要求往往是不同的,因此,上述方法只是一個(gè)參考,面對(duì)具體實(shí)驗(yàn)時(shí),同學(xué)們還應(yīng)根據(jù)參考文獻(xiàn)、實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定最佳方案。

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